화장품 미생물한도 시험법이란

화장품 내 미생물 수를 측정(총 호기성 생균수 시험) 하고,
특정미생물의 존재여부(특정미생물 시험)를 판단하여
화장품이 미생물 허용한도기준에 적합한지 확인하기 위한 시험입니다.

미생물한도 시험법은 다음의 절차 과정을 따릅니다.

 검체(화장품)에 희석액‧분산제 등을 넣어 검액을 제조합니다.
 시험에 들어가기 전, 제품에 적용되는 본 시험법이 적합한지 확인하기 위하여 시험법 적합성 시험을 수행합니다.
시험법이 적합하다고 판단되면, 검체 내 미생물 오염수준을 확인하기 위한 총 호기성 생균수 시험과 특정미생물 시험을 수행합니다.

​

검체의 전치리[검액 제조]

검체에 희석액, 분산제, 지용성 용매를 첨가하고 검체를 충분히 분산시키는 전처리 과정을 통해 보존제 등 항균활성물질을 중화시키거나 제거합니다.
희석액으로는 완충식염펩톤수(pH 7.0) 또는 인산완충액(pH 7.2), 분산제는 멸균한 폴리소르베이트 80 (Tween 80), 지용성 용매는 멸균한 미네랄 오일를 주로 사용합니다.
검체의 종류에 따라 적절한 전처리 과정을 선택하여 검액을 제조합니다.


배지성능 및 시험법 적합성시험

배지성능 및 시험법 적합성시험은 본 시험에 들어가기 전 시험 재료 및 방법을 신뢰할 수 있는지 미리 검증하는 과정입니다. 

검체 내 항균활성물질이 전처리 과정에서 충분히 제어되지 않는 경우나 시험재료가 오염되어 있는 경우 정확한 미생물 수를 측정하기 어렵습니다.
이에 화장품 성분에 의한 접종균 사멸여부를 확인하는 시험법 적합성과 희석액과 배지의 오염여부를 확인하는 배지 성능 시험을 수행해야 합니다.
총 생균수 시험법의 적합성시험에는 다음의 균주를 사용하며, 배양된 균은 완충식염펩톤수(pH 7.0)로 희석하여 최종적으로 배지에 접종되는 균수가 0.1 mL당 약 100 CFU가 되도록 합니다.
특정 미생물 시험법의 적합성시험에는 다음의 균주를 사용하며, 각 특정미생물 시험법의 단계별 양성반응을 확인하여 미생물 발육저지물질 존재유무를 확인합니다.


총 호기성 생균수 한도시험

총 호기성 생균수 시험이란?

화장품 안에 있는 호기성 세균과 진균의 수를 측정하는 시험입니다.

제시된 전처리법에 따라 검액을 제조하고, 한천평판도말법에 따라 검액은 최소 2개의 총 호기성 세균용 배양 평판배지에 0.1 mL를 도말합니다. 검출 한계를 낮추기 위하여 3개의 평판배지에 1 mL를 나누어 분주한 뒤 도말할 수 있습니다. 
또는 또는 한천평판희석법에 따라, 검액 · 대조액 · 음성 대조액 1 mL를 최소 2개의 페트리접시에 넣고 그 위에 멸균 후 45 °C로 식힌 시험용 배지 15 mL를 넣어 잘 혼합합니다.
배지는 세균의 경우 30-35 °C에서 적어도 48시간, 진균의 경우 20-25 °C에서 적어도 5일간 배양합니다.
세균은 평판당 300개 이하의 CFU를 최대치로 하여 측정하여 총 세균수를 측정하고, 진균은 100개 이하의 CFU를 최대치로 하여 총 진균수를 측정합니다.

특정 미생물 시험

특정미생물 시험​이란?

화장품 안에 특정미생물(대장균, 녹농균, 황색포도상구균)이 존재하는지 확인하는 시험입니다.
특정미생물 시험법은 제시된 선별 단계에 따라 수행하며, 양성 반응이 확인되면 다음 단계 시험을 진행합니다. 최종적으로 특정미생물의 존재여부를 판단하여 화장품이 미생물 허용한도기준에 적합한지 확인합니다.