화장품 보존력 시험

화장품의 제조 및 사용 과정에서 미생물 오염에 의한 화장품의 변질 또는 인체 감염 등을 방지하기 위해 보존제를 사용합니다.
이렇게 첨가된 보존제는 미생물의 생장 억제 또는 항균 작용 효과를 나타내어야 합니다.
식품의약품안전처에서는 국내 화장품의 품질 및 안정관리를 위해 화장품 보존력 시험법을 제시하고 있습니다.

화장품 보존력 시험​이란?

화장품의 품질 및 안전관리를 위해 화장품에 첨가된 보존제의 효력을 평가하는 시험
보존력 시험법은 검체에 평가 대상 미생물을 접종한 뒤 평가일 별로(접종 후 4주까지) 미생물 수의 변화를 분석하여 평가 기준을 충족하는지 확인하는 과정으로 구성됩니다.

시험용 미생물 준비
시험 대상 미생물을 적절한 조건에서 배양하여 접종용 균액을 제조합니다.
배양된 균은 완충식염펩톤수(pH 7.0)에 희석하며, 곰팡이의 경우 Tween 80 0.05%를 추가적으로 첨가하여 균액을 제조합니다. 
대상 검체의 균의 농도는 세균의 경우 약 106 CFU/mL, 효모와 곰팡이의 경우 약 105 CFU/mL가 되도록 합니다.

배지성능 및 시험법 적합성 확인
배지성능 및 시험법 적합성시험은 본 시험에 들어가기 전 시험 재료 및 방법을 신뢰할 수 있는지 미리 검증하는 과정입니다. 
검체 내 보존제 등 미생물발육저지물질을 중화시키거나 제거하여 실험의 정확도를 향상시키기 위해, 검체에 희석액, 용매, 중화제 등을 첨가하여 검체를 충분히 분산시키고 검체 제형에 따라 전처리 과정을 진행합니다.
검체 내 미생물발육저지물질이 전처리 과정에서 충분히 제어되지 않는 경우나 시험재료가 오염되어 있는 경우 정확한 미생물 수를 측정하기 어렵습니다. 이에 화장품 성분에 의해 접종균이 사멸하지 않는지 확인하는 시험법 적합 확인과 희석액과 배지가 오염되지 않았는지 확인하는 무균상태 확인 시험을 수행해야 합니다.

검체 접종 및 보관
검체는 제품 자체를 사용하거나 일정량을 멸균 용기에 옮겨서 사용하며, 최소 20 mL 또는 20 g의 제품을 사용합니다.
준비된 균액을 검체의 0.5 - 1.0 % 만큼 접종하고, 접종한 검체는 교반을 통해 충분히 균질화합니다.
교반이 완료된 검체는 미생물 배양기를 사용하여 상온 범위(20 - 25 ℃)에서 보관하면서 시험을 수행합니다.

평가일 별 검체 채취 및 미생물 수 확인
평가일은 접종 직후와 접종 후 7, 14, 21, 28일이며, 평가일마다 검체를 충분히 교반한 뒤 1 mL 또는 1g의 검체를 채취합니다.
전처리법에 따라 검액을 제조하여 한천평판도말법 또는 한천평판희석법에 따라 배양하여 미생물 수를 확인합니다.
평판당 300개 이하의 CFU를 최대치로 하여 세균수를 측정하고, 평판당 100개 이하의 CFU를 최대치로 하여 진균수를 측정합니다. 
만일 희석수가 다양할 경우에는 최대 균집락수를 갖는 평판을 사용합니다.

결과 평가
보존력 시험 결과는 7일 이내에 세균은 99.9% 이상 사멸, 진균은 90% 이상 사멸하는지 여부와 14 - 28일에 미생물 생장이 나타나지 않는지 여부를 기준으로 평가합니다.